W襄陽/棗陽聚丙烯酰胺應用范圍
W襄陽/棗陽聚丙烯酰胺應用范圍
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      W襄陽/棗陽聚丙烯酰胺應用范圍

      聚丙烯酰胺凝膠電泳簡稱為PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術。是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術,用于分離蛋白質和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝膠由單體丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成,聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨(APS)為催化劑,以四甲基乙二胺(TEMED)為加速劑。在聚合過程中,TEMED催化過硫酸銨產生自由基,后者引發丙烯酰胺單體聚合,同時甲叉雙丙烯酰胺與丙烯酰胺鏈間產生甲叉鍵交聯,從而形成三維網狀結構。

            作用原理:聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構,具有分子篩效應。它有兩種形式:非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE);非變性聚丙烯酰胺凝膠,在電泳的過程中,蛋白質能夠保持完整狀態,并依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開。

            聚丙烯酰胺凝膠電泳PAGE根據其有無濃縮效應,分為連續系統和不連續系統兩大類,連續系統電泳體系中緩沖液pH值及凝膠濃度相同,帶電顆粒在電場作用下,主要靠電荷和分子篩效應。不連續系統中由于緩沖液離子成分,pH,凝膠濃度及電位梯度的不連續性,帶電顆粒在電場中泳動不僅有電荷效應,分子篩效應,還具有濃縮效應,因而其分離條帶清晰度及分辨率均較前者佳。不連續體系由電極緩沖液、濃縮膠及分離膠所組成。濃縮膠是由AP催化聚合而成的大孔膠,凝膠緩沖液為pH6.7的Tris-HCl。分離膠是由AP催化聚合而成的小孔膠,凝膠緩沖液為pH8.9 Tris-HCl。電極緩沖液是pH8.3 Tris-甘氨酸緩沖液。2種孔徑的凝膠、2種緩沖體系、3種pH值使不連續體系形成了凝膠孔徑、pH值、緩沖液離子成分的不連續性,這是樣品濃縮的主要因素。

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