大鼠腦紅蛋白(NGB)ELISA試劑盒實驗意事項

1.血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。

2.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

3.吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。

4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶，如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。1．5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

5.液體全部加入酶標孔后，最好將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。

6.孵育時要使蓋板膜封好酶標板，防止水分蒸發，以防曲線不成線性。

7.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只要取出所需量。

8.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。

要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色

9.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

10.檢測吸光度前應將酶標儀打開，將其預熱30min以上。

11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。

12.孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。

13.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。

14.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。

15.對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

16.沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

17.標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。http://www.hufengbio.com/